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人視網(wǎng)膜上皮細胞的培養(yǎng)
人視網(wǎng)膜上皮細胞的培養(yǎng)
1.取產(chǎn)后的新鮮臍帶。如不立即培養(yǎng)可以保存于4℃中,但不宜超過12小時。無菌剪取長10~15厘米一段。其它如胚胎和幼體動物的大血管,(人視網(wǎng)膜上皮細胞)亦可用于培養(yǎng)。
2.先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的靜脈中,洗除殘血,注入口處宜用線繩結(jié)扎,以防液體返流。
3.用血管鉗夾緊臍帶一端,從另端向臍靜脈中徐徐注入*終濃度為0.1%的膠原酶,待末端出現(xiàn)液體后結(jié)扎之,令充滿血管,注入口亦應(yīng)結(jié)扎,以防液體返流,消化3~10分鐘。
4.吸出含有內(nèi)皮細胞的消化液,注入離心管中,為獲取更多細胞,可再注入溫PBS沖洗2~3次徹底清除干凈殘余細胞,一并注入離心管中離心。
5.吸除上清,加1640培養(yǎng)液,制成細胞懸液,(人視網(wǎng)膜上皮細胞)接種入瓶皿中培養(yǎng),順利時2~3天內(nèi)細胞即可長成單層。
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