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小鼠巨噬細胞培養(yǎng)方法
小鼠巨噬細胞培養(yǎng)方法
巨噬細胞(小鼠巨噬細胞)也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW264.7等,均獲惡性,培養(yǎng)中呈巨噬細胞形態(tài)和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難以建株。培養(yǎng)巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,以小鼠腹腔取材法*為實用,其法如下:
1、(小鼠巨噬細胞)實驗前三天,向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml(勿注入腸內(nèi))。
2、引頸殺死動物,手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3~5秒。
3、置動物于解剖臺上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側(cè),暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁。
4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同時從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內(nèi)充分流動。
5、用針頭輕輕挑起腹壁,使動物體微傾向一側(cè),使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。
6、小心拔出針頭,把液體注入離心管中,250g4℃離心10分鐘,去上清,加10mlEagle培養(yǎng)基。
7、計數(shù)細胞,每只小鼠可產(chǎn)生20~30×105細胞,其中90%為巨噬細胞。
8、為獲取3×105帖附細胞/平方厘米,需接種2.5×106/ml。
9、為純化培養(yǎng)細胞,去除其它白細胞,接種數(shù)小時后,去除培養(yǎng)液,用Eagle液沖洗1~2次后,再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃,5%CO2溫箱中培養(yǎng)。
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