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小鼠巨噬細胞分離方法

小鼠巨噬細胞分離方法
腹腔中分離
  1、小鼠巨噬細胞取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)無菌的液體石蠟或巰基乙酸肉湯或4%淀粉肉湯。3~4天以后收集腹腔細胞。
  2、如要收集腹腔靜置巨噬細胞,不注射刺激物,直接從一步開始。放血處死動物,以減少腹腔中的紅細胞。消毒腹部,沿腹中線注入3~4ml(豚鼠20~40ml,家兔50~70ml)冰中預冷的無菌PBS-H(含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS)。輕輕按摩腹部5分鐘。
  3、以下均無菌操作。剪開腹壁,用吸管吸出滲出液,再用同樣容量的預冷PBS-H沖洗腹腔2~3次。合并滲出液于離心管中,4℃離心250×g10分鐘,去上清液。
  4、用預冷的RPMI-1640培養液洗滌細胞3次,每次4℃離心250×g10分鐘,去上清液。用預冷的適量RPMI-1640培養液懸浮細胞,臺盼藍染色計數細胞并決定細胞活力。
  家兔肺泡小鼠巨噬細胞巨噬細胞的分離和純化


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