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PCR
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人臍靜脈血管內皮細胞的接種培養

人臍靜脈血管內皮細胞的接種培養
細胞接種培養
  1、細胞接種:
  (1)、包被液:用去離水配制0.5%明膠溶液,過濾除菌。
  (2)、人臍靜脈血管內皮細胞培養瓶包被:取2-4個T25培養瓶,每個培養瓶加2-3ml0.5%明膠溶液,搖勻使包被液布滿培養瓶底面,置37℃2小時或放置過夜。
  (3)、接種細胞:人臍靜脈血管內皮細胞接種前吸凈包被液,按2500-5000個細胞/cm接種細胞(1支5×10個細胞可接種2-4個培養瓶),每瓶加培養液3-5ml,搖勻后置37℃5%CO2培養箱內培養24小時,此時細胞已完全貼壁,更換培養液后繼續在37℃5%CO2培養箱內培養。
  (4)、擴大培養:一般每周更換培養液2次,至細胞長至覆蓋培養面的70-80%可進行傳代或凍存。
細胞凍存
  調整細胞數2-5×10個/ml,按含細胞的RPMI-1640液ml數,配制等量的凍存液。凍存液中FBS占80%,DMSO占20%。例:含細胞的RPMI-1640液為8ml,應配凍存液8ml,其中FBS為6.4ml,DMSO為1.6ml,混勻。置細胞懸液于冰浴中,逐滴加入凍存液,邊加邊搖動。加完后用吸管吹打混勻。于冰浴中分裝細胞于凍存管中,1.8ml/管,再將凍存管置于凍存盒內置-80℃冰箱,24小時后轉入液氮中保存。

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